组织研磨机对提取动物关节软骨组织总RNA

组织研磨机对提取动物关节软骨组织总RNA

实验目的
       研磨破碎软骨组织（大鼠膝关节软骨），提取其总RNA。
 
实验原理
       充分磨碎软骨样品（大鼠膝关节软骨），再用相关试剂提取其总RNA。
 
实验材料和器具
样品：大鼠膝关节软骨
仪器：多样品组织研磨仪（上海净信，Tissuelyser-24）
耗材：研磨罐（上海净信，1研磨单位），研磨珠（上海净信，8号研磨珠，1颗）
试剂：液氮若干
 
实验步骤
1.研磨软骨组织
1.1 取适量大鼠膝关节软骨组织，剪切成约1立方厘米小块；
1.2 将小块软骨组织置于液氮中2分钟或放入-80度冰箱冷冻30分钟；
1.3 将样品和研磨珠放入研磨罐中，盖好盖子；
1.4 将装好样品及钢珠的研磨管，放入已经在-20度冰箱预冷好的适配器中，加入变性液，β-巯基乙醇；
1.5 将适配器放入净信研磨仪中，在14单位频振条件下，研磨1min，可得到匀浆状的软骨组织；
2.总RNA提取
2.1 冰水浴下，加酸性水饱和酚，摇匀，加醋酸钠，氯fang、异戊醇混合液，冰水浴上15min；
2.2 4℃下，离心，取上清液，加氯fang、异戊醇混合液，离心取上清，加异丙醇，-20℃下沉淀，离心，得到凝胶状RNA和蛋白多糖混合沉淀，加无RNA酶水，溶解得胶状溶液；
2.3 取胶状溶液用plant RNAout试剂盒的RNA提取步骤得到总RNA沉淀，取沉淀，乙醇洗涤后用无RNA酶水溶解沉淀，即得关节软骨组织总RNA溶液。
 
实验结果
       采用本实验方法提取的动物关节软骨组织总RNA的收率高，并且纯度高、质量、完整性好，可以满足分子生物学研究应用。

         总RNA甲醛变性胶电泳结果

        Ⅱ型胶原PCR扩增产物电泳结果

参考文献：

［1］刘玉刚等，一种富含多糖的关节软骨组织总RNA提取方法初探，第三军医大学学报：2009年24期。